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天津津腾纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原

[导读]研究选用0.45μm孔径的滤膜,将小鼠腹腔灌洗液充分稀释,在杯式过滤器上边用吸管吹吸混匀边缓慢过滤,不加负压,避免了滤膜堵塞,速殖子随水流穿过微孔,天津津腾微孔滤膜在小鼠腹腔灌洗液中的有形成分主要为白细胞和少量红细胞

天津津腾纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原


研究选用0.45μm孔径的滤膜,将小鼠腹腔灌洗液充分稀释,在杯式过滤器上边用吸管吹吸混匀边缓慢过滤,不加负压,避免了滤膜堵塞,速殖子随水流穿过微孔,天津津腾微孔滤膜在小鼠腹腔灌洗液中的有形成分主要为白细胞和少量红细胞,这些细胞的直径均大于5μm,很少能通过滤膜。

本研究使用的改良纤维素滤膜纯化法的平均白细胞清除率99。9%,红细胞清除率80。3%,虫体回收率71%,均较其他研究者报道的有大幅提高。在操作过程中,应尽可能采用严重发病的小鼠收集腹腔灌洗液,因为此时速殖子密度最高。死亡后的小鼠腹腔灌洗液会有出血,或细菌开始繁殖,不能采用。偏小的小鼠发病进程较快,发病后腹腔液中速殖子密度较高而细胞数较少,适合用于提纯虫体。冲洗收集腹腔灌洗液时注意不要刺到腹腔器官,否则会有细菌和血液混人。过滤前应镜检,确定无污染。安装滤膜时应注意滤膜的正面朝上。滤膜为一次性使用,一张滤膜过滤一只小鼠的腹腔灌洗液。

本研究采用纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子,细胞清除率高,虫体回收率高,制备的抗原特异性好,效价高,可应用于弓形虫病的免疫学研究和诊断试剂的研发。


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